品 名:重組牛腸激酶(組氨酸標(biāo)簽)(Recombinant Bovine Enterokinase, His-tag, rbEK-His)
規(guī) 格:200 U(液體),1000 U(液體),100 μg,1 mg,特殊訂制
產(chǎn)品形式:液體為1 U/μl rbEK-His, 50 mM Tris-HCl, 50%甘油, pH 8.0;凍干粉凍干前為50 mM Tris-HCl (pH 8.0)酶溶液
分 子 量:27.6 kDa(SDS-PAGE檢測約為30 kDa)
等 電 點(diǎn):5.72
比 活 性:≥40000 U/mg,即1 mg rbEK-His至少切割2000 mg融合蛋白。
純 度:≥95%(SDS-PAGE檢測)
A280nm(1 mg/mL):1.95
內(nèi) 毒 素:≤5 EU/mg
來 源:大腸桿菌
保存條件:-20℃保存
有 效 期:3年
活性定義:25℃,反應(yīng)緩沖液為50 mM Tris-HCl (pH 8.0),底物為50 μg 1 mg/ml含酶切位點(diǎn)的融合蛋白,16 h內(nèi)切割95%的融合蛋白所需的酶量為1個(gè)酶活力單位(1 U)。
相關(guān)介紹:
腸激酶(EC 3.4.21.9)是一種絲氨酸蛋白水解酶,能高效專一地識(shí)別蛋白質(zhì)中Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(DDDDK)序列,并在賴氨酸(Lys,K)的C端水解肽鍵,產(chǎn)生切割,在生物體內(nèi)水解胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐鹊鞍酌,由于腸激酶具有高度專一性和高效酶切特性,廣泛應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)。
天然腸激酶由1條115 kDa的重鏈和1條35 kDa的輕鏈組成,重鏈起錨定細(xì)胞膜的作用,輕鏈具有全酶完整的催化活性。本產(chǎn)品為牛腸激酶的輕鏈活性核心區(qū)域與組氨酸標(biāo)簽的融合蛋白,采用大腸桿菌分泌技術(shù)表達(dá),與天然腸激酶相比,比活性更高。同時(shí)帶有組氨酸標(biāo)簽,酶切后可用鎳柱(NRPB07)去除樣品中的rbEK-His,特別適用于基因工程融合蛋白的酶切。
注意事項(xiàng):
1)一些試劑會(huì)影響酶的活性,如 >2 M Urea,>250 mM NaCl,>20 mM β-ME,>0.1% SDS,>50 mM Imidazole,樣品中如果含有這些成分,需要透析至50 mM Tris-HCl (pH 8.0);
2)磷酸鹽會(huì)抑制腸激酶的活性,應(yīng)避免使用磷酸鹽緩沖液作為酶切體系;
3)溶解后放置在冰浴上并盡量馬上使用;
4)若一次性用不完,請(qǐng)?jiān)谑褂们芭渲瞥赡敢翰⒎盅b成小規(guī)格(保證一次試驗(yàn)的用量)保存在-65℃,避免反復(fù)凍融影響蛋白活性
5)避免使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑、高濃度的有機(jī)溶劑等易引起蛋白質(zhì)變性的試劑;
6)本產(chǎn)品僅限于科研使用。
M:蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)
Lane 1:rbEK-His